Антинуклеарные антитела расшифровка анализа. АНА (антинуклеарные антитела). Основные понятия, характеризующие сзст

Системные ревматические заболевания
Антинуклеарный фактор (АНФ) и тип свечения

Определение антинуклеарного фактора (АНФ) представляет собой основной метод выявления антинуклеарных антител, который позволяет выявить большинство разновидностей антинуклеарных антител, включая аутоантитела к нуклеиновым кислотам (дсДНК, осДНК, РНК), конформационным и нерастворимым антигенам. Результатом определения АНФ является факт присутствия аутоантител в диагностическом титре, конечный титр разведения сыворотки, отражающий аффинность и концентрацию аутоантител, а также тип свечения ядра клетки (тест 01.02.15.005) . Характеристики конкретной методики зависят, прежде всего, от выбора субстрата, который может варьировать от криосрезов (крысиных печени или почки) до культивируемых пролиферирующих клеточных линий (Hep2, Kb, HeLa), а также метода фиксации ткани, который может влиять на сохранность ряда ядерных антигенов АНА.

История разработки тестов для выявления антинуклеарных антител:

Начало ХХ века — «гиалиновые тельца» в цитоплазме лейкоцитов

1948 год Hargraves, Richmond, Morton — метод обнаружения LE-клеток invitro при длительной инкубации лейковзвеси больных СКВ

1951 год Lee, Michael, Vural — обнаружили сывороточный фактор, стимулирующий фагоцитоз ядер лимфоцитов лейкоцитами периферической крови

1957 год Holoborow, Weir, Johnsonиспользовали метод непрямой иммунофлюоресцнеции, разработанный Coons в 1950 для выявления АНФ на криосрезах печени человека

1961 год Beck — использовал ткани лабораторных животных

1982 год Tan — использовал перевиваемую клеточную линию человека HEp-2, этот тест стал золотым стандартом выявления АНА

1958 год Jones — обнаружил в крови больных синдромом Шегрена фактор, способный преципитировать экстракты ядер клеток, что послужило толчком для описания большинства разновидностей антинуклеарных антител

Непрямая иммунофлюоресценция на перевиваемой клеточной линии Нер2

Метода выявления АНФ был разработан Таном (Tan, 1982), применившим в качестве субстрата человеческую перевиваемую эпителиоидную клеточную линию HEp-2 (ATCC ref.no. CCL-23). Это клеточная линия, полученная из аденокарциномы гортани человека, представляет собой крупные полиплоидные неороговевающие плоские эпителиоциты, образующие монослой на пластике и стекле.

Рисунок: клетки клеточной линии НЕр-2, окрашенные гематологическим красителем.

Сравнительная неприхотливость этой линии, крупные ядра и присутствие всех человеческих антигенов сделало метод непрямой иммунофлюоресценции с использованием перевиваемой клеточной линии НЕр-2 основным методом обнаружения АНФ. В англоязычной литературе отсутствует единое название для этого метода, иногда этот метод для краткости обозначают как FANA(Fluorescent AntiNuclear Antibody detection). Отсутствие единства номенклатуры породило путаницу в названии лабораторных тестов. Иногда под термином «антинуклеарные антитела» иммунологические лаборатории называют тесты, как основанные на методах иммуноферментного и иммунохимическом анализе, так и метод иммунофлюоресценции. В русскоязычной литературы мы считаем необходимым сохранить отечественное название этого показателя - «антинуклеарный фактор» (АНФ), чтобы отличить иммунофлюресцентный метод от других тестов для обнаружения АНА.

Необходимо выявлять АНФ класса IgG, так как выявление АНФ, представленных другими классами иммуноглобулинов не имеет самостоятельного диагностического значения. Стандартные разведения сыворотки больного инкубируются с тканевым субстратом, что позволяет антинуклеарным антителам из сыворотки больного связаться с соответствующими ядерным мишенями. После этого места связывания аутоантител детектируются с помощью античеловеческой антисыворотки, меченной флюоресцеином.

Хотя в качестве субстратов могут применяться и другие человеческие клеточные линии, однако благодаря хорошей морфологии и удобству культивирования именно линий Нер-2 стала общепризнанным субстратом непрямой иммунофлюоресценции. Ее применение улучшает чувствительность теста за счет яркой флюоресценции даже при значительных разведениях сыворотки больного, а большое, богатое эухроматином ядро позволяет точно описать тип свечения. Кроме того, применение клеточной линии Hep-2 способствует обнаружению антител Ro/SS-A, а также антител к антигенам ядрышка, которые плохо при использовании криосрезов ткани лабораторных животных. Среди других преимуществ HEp-2 можно отметить высокую частоту деления клеток, позволяющую выявлять антитела к антигенам, экспрессирующимся только при делении клетки, и отсутствие клеточного матрикса ткани, затрудняющего визуализацию специфического свечения при сравнении с гистологическими срезами.

Титры антинуклеарного фактора

Титр АНФ определяется как последнее разведение сыворотки больного, которое обладает четкой флюоресценцией ядер клеток. При использовании тканей лабораторных животных диагностический титр АНФ составляет 1:8-1:10, в то время как при использовании клеточной линии НЕр-2 рекомендуется использовать исходный титр 1:80. В этом случае в норме титры АНФ менее 1:160.

При использовании титров менее 1:160 частота слабоположительных результатов у клинически-здоровых лиц составит не более 5%, и в то же время не позволит пропустить значимые титры АНА у больных диффузными болезнями соединительной ткани.

Для определения конечного титра обычно используется титрование шагом х2 (1:160-1:320 - 1:640 - 1:1280 - 1:2560 - 1:5120 и т.д. Может использоваться и более грубое титрование. На фоне обострения ревматических заболевания обычно отмечаются титры АНФ более 1:640, а при ремиссии титры снижаются до 1:160-1:320.

Существуют рекомендации по бальной оценке результатов выявления АНФ, указыващей содержание «в крестах». Это позволяет лабораториям экономить реактивы и уменьшить трудозатраты на выполение исследований. В этом случае определение конечного титра не представляется возможным. Необходимо учитывать, что конечный титр имеет более важное значение, по сравнению с количеством связавшихся с субстратом аутоантител, так как непосредственно связан с аффинностью их взаимодействия с антигеном. Желательно определять конечный титр у всех положительных больных, что позволяет уточнять присутствие в сыворотке высокоаффинных аутоантител, которые более тесно связаны с активностью процесса.

Тип свечения ядра антинуклеарного фактора

Уже в первом опыте клинического применения непрямой иммунофлюоресценции для выявления АНФ с использованием криосрезов тканей лабораторных было отмечено, что сыворотка больных с аутоиммунными заболеваниями заболеваниями по разному «окрашивала» ядра клеток, что приводило к селективному свечению некоторых структур ядра. Уточнение этого феномена привел к описанию так называемых «типов свечения» ядра в иммунофлюоресцентном тесте. Это связано с тем, что каждая разновидность АНА имеет конкретные клеточные мишени, вследствие чего тип свечения ядра, ядрышка и цитоплазмы клетки отражает взаимодействие АНА сыворотки больного с антиген-содержащими структурами внутри клетки. Тип свечения зависит от присутствия конкретных аутоантител в сыворотке крови больного, на основе чего, можно сделать предварительное заключение относительно тех разновидностей АНА, которые имеются в данной сыворотке. Однако применение гистологических срезов тканей лабораторных животных не позволяет достоверно установить тип свечения. В то же время использование перевиваемых клеточных линий, таких как Нер-2 позволяет описать значительное количество вариантов окрашивания ядра и цитоплазмы. Существует три основные группы антигенов, присутствие антител к которым определяет различные типы свечения:

Тип свечения ядра клетки значительно увеличивает информативность выявления АНФ, в связи с чем, должен рутинно определяться при определении этого показателя. Использование клеток линии НЕр-2 позволяет охарактеризовать более 20 различных вариантов окрашивания ядра, которые зависят от спектра АНА, присутствующих в исследуемой сыворотке. Однако для практической лаборатории достаточно различать 6 основных вариантов свызывания аутоантител с антиген-содержащими структурами клетки.

Выделяют гомогенный, периферический, гранулярный (мелко-/крупно-), ядрышковый, центромерный и цитоплазматический типы свечения ядра. Каждому типу свечения присущи очень характерные признаки, которые позволяют отличить один вариант от другого, а также набор антигенам, с которыми реагируют аутоантитела в сыворотках больных. Описание типов свечения представляет ценную клиническую информацию само по себе, кроме того, тип свечения может указывать на необходимость проведения определенных лабораторных тестов в дальнейшем.

При гомогенном типе свечения аутоантитела реагируют с теми антигенами, которые распределены в ядре диффузно, т.е. входят в состав хроматина. Характерно, при обнаружении гомогенного типа свечения, в делящихся клетках ярко окрашиваются конденсированные хромосомы. Основными структурными единицами хроматина являются нуклеосомы - комплексы ДНК и гистонов. Таким образом, гомогенный тип свечения предполагает наличие антител против нуклеросом, дсДНК и антител к гистонам. Он встречается у больных с СКВ и лекарственной волчанкой, а также у больных со склеродермией. Обычно обнаружение высокого титра АНФ с гомогенным типом свечения указывает на диагноз СКВ.

Периферический тип свечения часто выделяют отдельно, хотя он является разновидностью гомогенного типа свечения. Его выявление является артефактом фиксации клеток, что приводит к перераспределению хроматина в ядре на периферию. Важно отличать периферический тип свечения от окрашивания ядерной мембраны, которое отмечается при аутоиммунных заболеваниях печени. Периферический тип свечения обнаруживается у больных с антителами к двуспиральной ДНК и выявляется преимущественно у больных с СКВ.

Гранулярный тип является наиболее частым встречающимся и, одновременно, наиболее неспецифическим. Иногда этот тип свечения в отечественной литературе называют «крапчатым» или «сетчатым». Название «гранулярный» более точно отражает этот феномен, так как в этом случае аутоантитела реагируют с гранулами в ядре, представляющими надмолекулярные нуклеопротеиновые комплексы. Такие комплексы белков и нуклеиновых кислот осуществляют в ядре ряд функций, необходимых для нормального функционирования клетки. К таким комплексам, в частности, относятся сплайсосомы, которые осуществляют посттранскрипционную перестройку мРНК, необходимую для синтеза белка на рибосомах. В составе присутствут множество различных нуклеопротеинов, что обуславливает многообразие антигенных мишеней при обнаружении гранулярного типа свечения. К основным аутоантигенам, антитела к которым приводят к визуализации гранулярного типа свечения, относят Sm, U1-RNP, SS-A, SS-B антигены и PCNA. Клетки в процесс деления утрачивают большинство сформированных нуклеопротеиновых комплексов, поэтому митотические фигуры в клеточной линии при гранулярном типе свечения не окрашиваются. Гранулярный тип свечения ядра отмечается у больных при СКВ, СШ, СС, ДМ/ПМ, РА и ряда других аутоиммунных заболеваниях. Низкие титры АНФ с гранулярным типом преобладает в сыворотках крови у клинически здоровых лиц с АНФ без признаков системного заболевания.

Выявления очень высоких титров АНФ (1:2560-1:10000) с крупногранулярным типом свечения ядра обычно указывает на диагноз смешанного заболевания соединительной ткани и требует дообследования для выявления RNPантигена, который является основным серологическим маркером этого заболевания.

Антигены ядрышка могут выступать в качестве мишеней АНА, что приводит к обнаружению ядрышкового типа флюоресценции. Выявление ядрышкового типа свечения характерно для склеродермии и ее разновидностей. Ядрышковый тип флюоресценции определяется у больных при наличии антител к компонентам ядрышка, таким как PHК полимераза 1, NOR, U 3 RNP, PM/Scl.

Центромерный тип флюоресценции отмечается при появлении антител к центромерам хромосом, и обнаруживается только в делящихся клетках. Его присутствие характерно при CREST варианте склеродермии.

Цитоплазматический тип свечения указывает на антитела к тРНК-синтетазам, в частности Jo-1, которые отмечаются при полимиозите. Кроме того, он выявляется у больных с АНА, направленными против других компонентов цитоплазмы клетки: антитела к актину при аутоиммунном гепатите, антитела к митохондриям при первичном билиарном циррозе.

Можно охарактеризовать ряд других разновидностей свечения, причем эти типы окрашивания ядра клеток могут быть характерны для конкретной разновидности АНА. Так антитела к Scl-70 в иммунофлюоресцентном тесте на HEp-20 клетках дают мелкогранулярное окрашивание ядра и ядрышек, анти-р80 - светящиеся точки в ядре, которые отсутствуют в митотических клетках. Однако необходимо указать на редкость и разнообразие таких феноменов, что делает излишним их выявление при рутинных исследованиях.

Нередко может встречаться сочетание нескольких типов свечения, например мелкогранулярного и ядрышкового, что характерно для антител к Scl-70. Более того, часто в низких разведениях преобладает один тип свечения, например гранулярный, а при дальнейших разведениях выявляется гомогенный или центромерный типы флюоресценции, что свидетельствует о наличии в сыворотке больного различных видов АНА. Хотя тип свечения дает врачу определенные данные в пользу того или иного диагноза, необходимо принимать во внимание сравнительно низкую его специфичность и разнообразие встречающихся феноменов, что требует дальнейшего лабораторного обследования.

Обнаружение АНФ является основой для использования других лабораторных тестов, уточняющих спектр АНА в крови больных. Учитывая крайнюю информативность этого теста, дальнейшее тестирование и анализ результатов последущего обследования должен интерпретироваться в зависимости от результатов оценки типа свечения и титра АНФ.

Хотя отсутствие значимых титров АНФ практически всегда исключает диагноз активного системного ревматического заболевания, но при использовании клеточной линии НЕр-2, у 2-4% больных, удовлетворяющих критериям для диагноза СКВ, АНА не определяются или титры низки. Этих больных иногда относят к группе «АНФ-негативной СКВ », для уточнения диагноза у таких больных требуется дальнейшее обследование, прежде всего выявление антител к SS-Aантигенам. Эти антигены обладают хорошей растворимостью и могут утрачиваться из ядер клеток. Для сокращения этой категории пациентов используется комплексное тестирование, включающее определение антител к экстрагируемым ядерным антигенам, так называемый «скрининг заболеваний соединительной ткани », тест 000723 . Отрицательный результат такого обследования позволяет с очень высокой вероятностью позволяет исключить диагноз СКВ и других системных ревматических заболевании.

Антинуклеарные антитела (АНА,ANA, антиядерные антитела, антинуклеарный фактор-АНФ)- метод НИФ на линии клеток HEp-2 с определением тип свечения. - показатель аутоиммунных заболеваний соединительной ткани. АНА представляет собой группу аутоантител к белкам и другим компонентам (включая ДНК), находящимся в ядрах клеток. Основные показания к применению: исключение диагноза - системная красная волчанка (считается, что АНА появляются в 90% случаев СКВ, иными словами, отрицательный результат с вероятностью около 90% исключает диагноз СКВ), дифференциальная диагностика системных коллагенозов (системная красная волчанка, склеродермия, узелковый периартериит, дерматомиозит), хронический активный гепатит.

К настоящему времени описано более 200 разновидностей АНА, направленных против нуклеиновых кислот, гистонов, белков ядерной мембраны, компонентов сплайсосомы, рибонуклеоротеинов, белков ядрышек и центромер. При этом они повреждают соединительную ткань, что и способствовало внедрению определения антинуклеарного фактора в качестве теста на системные заболевания соединительной ткани. Под термином «антинуклеарный фактор» понимают тест для выявления антинуклеарных антител с помощью метода непрямой иммунофлюоресценции.

Одним из способов выявления антинуклеарного фактора в крови (антинуклеарных антител) является метод непрямой иммунофлюоресценции путем нанесения сыворотки пациента на клетки тканей перевиваемой линии человеческих клеток HEp-2 (клетки эпителиальной карциномы гортани человека линии Hep-2, содержащие различные ядерные антигены), используя меченый конъюгат с человеческими антителами. В качестве субстратов могут применяться и другие человеческие клеточные линии, однако благодаря хорошей морфологии и удобству культивирования именно линий Нер-2 стала общепризнанным субстратом непрямой иммунофлюоресценции. Метод обнаружения АНФ был разработан Tan в 1982, применившим в качестве субстрата человеческую перевиваемую эпителиоидную клеточную линию HEp-2. Это клеточная линия, полученная из аденокарциномы гортани человека, представляет собой крупные полиплоидные неороговевающие плоские эпителиоциты, образующие монослой на стекле. Сыворотку больного инкубируются с тканевым субстратом, при этом антинуклеарные антитела из сыворотки больного (если они присутствуют) связываются с соответствующими ядерным антигенами. Места связывания аутоантител детектируются с помощью античеловеческой антисыворотки, меченной флюоресцеином. Результаты реакции оцениваются микроскопией с помощью люминисцентного микроскопа и визуальной оценки характера свечения связавшихся антител. Среди преимуществ HEp-2 (при сравнении с криосрезами тканей животных) можно отметить высокую частоту деления клеток, позволяющую выявлять антитела к антигенам, экспрессирующимся только при делении клетки, и отсутствие клеточного матрикса ткани, затрудняющего визуализацию специфического свечения при сравнении с гистологическими срезами. При некоторых заболеваниях, например СКВ, системной склеродермии (системный склероз), некоторых инфекциях, иммунная система пациентов воспринимает ядра (белки ядер) клеток собственных тканей, как чужие, и продуцирует к ним антитела (антинуклеарные антитела - AHA). При этом они повреждают соединительную ткань, что и способствовало внедрению определения антинуклеарного фактора в качестве теста на системные заболевания соединительной ткани.

При интерпретации данных следует учитывать, что спектр AHA включает в себя большую группу аутоантител к ДНК, нуклеопротеидам, гистонам, ядерным рибонуклеопротеидам и другим компонентам ядра. Таким образом, тест направлен на обнаружение различных антител к компонентам ядра и цитоплазмы, которые впервые были обнаружены при СКВ. В дальнейшем диагностические критерии теста были расширены в связи с обнаружением данных антител и при других заболевания соединительной ткани.

В скрининговых тестах для определения суммарных АНА обычно используется набор следующих антигенов, являющихся основными маркерами аутоиммунных заболеваний соединительной ткани: SS-A (Ro), SS-B (La), BNP70, Sm, RNP/Sm, J01, центромере B.
Основные антигены, применяющиеся в современных наборах для выявления ядерных антител класса IgG представлены следующим набором:

SS-A (Ro) - ядерные рибонуклеопротеины, (полипептиды). Антитела на них обнаруживаются, чаще, при системной склеродермии (60 % случаев), синдроме Шегрена (до 70% случаев) и при СКВ (до 30% случаев). Считается, что если данные антитела обнаруживаются в крови у беременных, то это является показателем риска увеличения возникновения неонатального волчаночноподобного синдрома у новорожденного ребенка (неонатальный люпус-синдром). Данные антитела матери проходят через плаценту и вызывают поражение плода, приводящие к гемолитической анемии и тромбоцитопении. К тяжелым последствиям относят поражение проводящей системы сердца ребенка (вплоть до постоянной кардиостимуляции). Отмечено, что у женщин у которых во время беременности был выявлен значительный титр данных антител, без явных клинических признаков, в дальнейшем развивается какое либо аутоиммунное заболевание, включая СКВ.
SS-B (La) - ядерные белки. Антитела к ним выявляются до 60% случаев при синдроме Шегрена и в 15% случаев при СКВ.
Scl-70 - белок-фермент, участвующий в обмене нуклеиновых кислот (топоизомераза-1). Антитела на данный белок наиболее специфичны при системной склеродермии (до 70% случаев).
Двухцепочечная ДНК - нативная ДНК. Антитела к ДНК наиболее специфичны при СКВ (до 80% случаев) и практически не определяются при ревматоидном артрите и склеродермии.
RNP/Sm - Комплекс антигенов RNP/Sm состоит из U1-рибонуклеопротеидов: U1-68, U1-A, U1-C, U5, U6; а также из Sm-полипептидов: SmA | , SmB | B, SmD, SmE, SmF, SmG. Антитела, образующиеся к этим антигенам наиболее специфичны для смешанных заболеваний соединительной ткани - т.е. при наличии симптомов склеродермии, ревматоидного артрита, СКВ, полимиозита (около 95% случаев) и в меньшей степени для СКВ (до 30% случаев).
Jo-1 - фермент - синтетаза аминоацилтранспортной РНК. Аутоантитела к данному белку являются диагностически значимыми при миозите (полимиозит/дерматомиозит).
CENP-B (Центромера) - для выявления Антицетромерных антител (Anti-Centromer B), с целью диагностики CREST-синдрома (данный синдром представляет собой совокупность кальциноза кожи, синдрома Рейно, нарушения моторики пищевода, склеродактилии, телеангиэктазии). CREST-синдром относится к варианту системной склеродермии (системный склероз). Данные антитела у больных свидетельствуют о благоприятном течении системной склеродермии и говорят о небольшом поражении внутренних органов.
Hep-2 клетки - клетки эпителиальной карциномы гортани человека линии Hep-2, содержащие много различных ядерных антигенов, включая антиген SS-A (Ro) и антигены центромеры. Антитела к Hep-2 обнаруживаются у больных с полимиозитом и дерматомиозитом до 90% случаев.
Митохондрии (PDC) - PDC - пируватдегидрогеназный комплекс. Большая группа антимитохондриальных антител представляют собой аутоантитела, которые образовались на ферменты пируватдегидрогеназного комплекса, располагающегося в митохондриях клеток и участвующего в окислительном декарбоксилировании пирувата.

Часто АНА обнаруживаются при билиарном циррозе печени.

AHA обычно не проникают в живые клетки и поэтому безвредны. Но иногда они образуют комплексы антиген-антитело, которые вызывают повреждение ткани (как, например, при СКВ поражение почек). В связи с вовлечением в патологический процесс многих органов диагностическое значение определения AHA невелико и результаты анализа лишь частично подтверждают клинические данные.

Помимо ревматических заболеваний, АНА обнаруживаются и при хроническом активном гепатите до 50% случаев. Появление (низкие титры) возможно при воспалительных заболеваниях, онкологии и вирусных инфекциях.

Сравнительная частота выявления антинуклеарных антител.

Заболевание и состояние	Частота выявления, %
СКВ	95-100
Люпоидный гепатит (новое название - хронический аутоиммунный гепатит)	70 -80%
Синдром Фелти (Felty. 1924 г.) - ревматоидный артрит + спленомегалия + нейтропения + лейкопения + лимфоаденопатия.	95-100
Системная склеродермия	75-80
Лекарственный волчаночныи синдром (гидралазин, прокаинамид, изониазид)	Около 50
Синдром Шегрена (Аутоиммунное системное поражение соединительной ткани. Характеризуется вовлечением в патологический процесс желез внешней секреции, главным образом слюнных и слезных, и хроническим прогрессирующим течением).	40-75
Клинически здоровые родственники пациента с СКВ	Около 25
Дискоидная красная волчанка	15-50
Хронический ювенильный артрит, ревматоидный артрит	15-30
Узелковый периартериит	15-25
Дерматомиозит и полимиозит	10-30
Ревматизм	Около 5
Синдром Рейно	15-20

На основе антител и определения показателей их концентрации в плазме крови происходит диагностика многих состояний организма. Одним из показателей является антинуклеарный фактор, который объединяет под своим названием группу антител разного рода, направленных против клеточных составляющих. При выявлении подобного фактора есть смысл говорить об аутоиммунном заболевании, особенно системной красной волчанке.

Хоть тест является универсальным для определения многих системных патологий организма, в частности, такого серьезного заболевания, как красная волчанка, с ним связаны некоторые интересные особенности. Применять его стали с 1957 года, но широкое распространение методика получила только с конца 80-х годов прошлого столетия. Стоит отметить, что наличие имплантов в груди повышает титр антиядерных антител, что наблюдается от 5% до 55% всех случаев у пациентов женского пола.

Что собой представляют

Комплекс антител, который включает в себя антинуклеарный фактор, представлен более чем 200 показателями, чаще всего это иммуноглобулины класса G, в редких случаях IgМ и IgА. Появляются они при патологиях, характеризующихся аутоиммунным или ревматическим характером поражения в результате нарушенной толерантности иммунитета к собственным тканям.

При некоторых состояниях иммунитет направляет все свои силы не на борьбу с чужеродными факторами, а против собственных тканей, клеток, чего в норме не должно происходить. Нарушается толерантность к некоторым клеткам, на которые направлена агрессия, развивается аутоиммунное заболевание. Антитела, вырабатываемые в процессе заболевания, или комплексы носят название аутоиммунных.

У многих людей в небольшом количестве есть аутоантитела, но это не является признаком заболевания. Только серьезный сбой в иммунитете способен привести к тому, что возрастает уровень аутоантител, это является поводом к тому, чтобы выставить соответствующий диагноз. Но его еще должны дополнить остальные исследования, в частности, крови, мочи, а также клинические проявления.

У человека, страдающего системной красной волчанкой, АНФ повышается еще до того, как разовьются первые симптомы. Из всех заболевших 95% имеют в крови повышенный антинуклеарный фактор, который дополняется симптомами болезни, что, в свою очередь, подтверждает диагноз.

Механизм появления фактора

Есть несколько причин, способствующих развитию заболевания у человека. Происходит все в определенной последовательности:

Под влиянием ультрафиолета солнца на кожные покровы запускаются процессы заранее генетически запрограммированной гибели клеток, которая носит название апоптоза. Это нормальная реакция организма, однако при болезнях системного характера усиленно начинают мигрировать лимфоциты.
Ранее недоступные, невидимые составляющие клеток становятся доступны для иммунитета, в частности, клеточная оболочка, ядрышки, гистоны, оболочка ядра, другие. Они становятся оголенными, а макрофаги вместо утилизации подобного материала передают информацию далее, провоцируя иммунный ответ организма.
На сигнал, подаваемый макрофагом, отвечают В-лимфоциты, вырабатывающие антиядерные антитела, они вступают во взаимосвязь с соответствующим антигеном, образуя комплекс.
Комплексы откладываются на мембранах органов, тканей, обильно это происходит на поверхности стенки сосуда изнутри, активируется комплемент или местный ответ иммунитета.
Повреждение нарушает функцию органа.

Анализ, показания

Есть несколько показаний, когда назначается анализ на антинуклеарные антитела. Прежде всего, это подозрение на развитие системной красной волчанки, синдрома Шегрена. Если есть одно системное заболевание, врачом подозревается другое, к примеру, на фоне волчанки может развиться антифосфолипидный синдром.

Симптомы, когда стоит сдать анализ

Всегда есть симптомы, появление которых должно насторожить человека, заставить его пройти обследование. Врач должен сориентировать пациента, если есть:

Артрит, проявляющийся воспалением сустава, с болью, отеками, нарушенной подвижностью, покраснением кожи над ним, повышением температуры.
Не помешает обследование при перикардите, плеврите, причина которых неизвестна.
Поражение почек, связанное с нарушением состояния иммунной системы, появление изменений в анализе мочи, в частности, белка, крови.
Еще одним показанием является гемолитический вариант анемии, при которой в большом количестве разрушаются эритроциты, повышается уровень билирубина в крови, анализе мочи.
Показанием является понижение уровня тромбоцитов, нейтрофилов в формуле лейкоцитов.
Проявления на коже в виде сыпи, утолщения, которые возникают после пребывания на солнце.
Синдром Рейно, при котором периодически свой цвет меняют пальцы на стопах, кистях. Они становятся бледными, синими или краснеют, нарушается чувствительность, беспокоит боль.
Показанием является нехарактерная симптоматика со стороны неврологии или психиатрии.
Если повышается температура, развивается усталость, понижается масса тела, увеличиваются лимфатические узлы.

Разновидности исследования

Есть две методики, которые позволяют определить антинуклеарные антитела в крови. Первая носит название непрямой иммунофлуоресцентной микроскопии. Линия клеток для нее получена из аденокарциномы в области гортани. Если есть антинуклеарные антитела, они связываются со специфическими антигенами, после чего добавляются метки, способные светиться в определенном спектре света. Под микроскопом возникает возможность определить интенсивность, тип свечения.

Эта методика признана лучшей для определения показателя антинуклеарных антител. Она имеет другое название – волчаночные тест-полосы.

Результатом исследования является титр или максимальное разведение крови, которое дает свечение. При положительном результате описывается тип свечения. Титр повышается при большом скоплении антител. Низкий титр можно считать отрицательным результатом, а при высоком можно говорить о том, что повышается концентрация антиядерных антител.

Вторым вариантом диагностики является ферментный иммунный анализ. Суть его состоит в том, что антитела, которые есть в крови, вступают в связь с соответствующим антигеном, результатом является то, что раствор меняет свой цвет.

Стоит отметить, что положительный результат анализа не является стопроцентным диагнозом. Это сигнал к тому, что требуется дополнительное обследование, которое поможет выявить заболевание в раннем периоде, назначить лечение. При отрицательном анализе на антинуклеарные факторы можно говорить об их полном отсутствии, но диагноз предполагаемой аутоиммунной патологии при этом не исключается.

В обязательно порядке нужно сдавать анализы крови на различные показатели. Однако стоит помнить, что на результат может повлиять прием некоторых лекарств, а также острые или хронические заболевания. Разобраться во всех тонкостях всегда поможет специалист, после чего установит диагноз, порекомендует, что делать дальше.

Антинуклеарный фактор

Антинуклеарный фактор – лабораторный анализ, направленный на определение различных видов специфических иммуноглобулинов к структурам клеточного ядра. Показатель АНФ повышается при системных заболеваниях соединительной ткани. Тест выполняется с целью их диагностики, дифференциации, контроля лечения, выявления обострений. Назначается при клинических и лабораторных признаках системной красной волчанки, склеродермии, синдрома Шарпа, Шегрена, ревматоидного артрита, воспалительной миопатии. Исследованию методом РНИФ подвергается сыворотка венозной крови. Нормальный показатель – титр не выше 1:160. Сроки подготовки данных теста – 8 рабочих дней.

В основе ревматических болезней лежит аутоиммунная реакция против структур ядра клетки – комплексов из протеинов и нуклеиновых кислот. Антигены образуются при программированной гибели эпителиоцитов и лимфоцитов. Ультрафиолетовые лучи, инфекционные агенты, лекарства ускоряют разрушение клеток, замедляют удаление апоптозных телец, провоцируют развитие аутоиммунных процессов. Антитела к структурам ядра представлены множеством видов, при исследовании антинуклеарного фактора выделяется около восьми. Преимуществом теста является высокая специфичность – определяются антитела, которые невозможно очистить для ИФА. Однако часть иммунных комплексов экстрагируется в плазму при выполнении РНИФ, поэтому существует вероятность ложноотрицательного результата.

Показания

Исследование антинуклеарного фактора показано при системных патологиях соединительной ткани. Основанием для назначения теста служат:

Симптомы ревматического заболевания . Характерные проявления – лихорадка, усталость, слабость, снижение массы тела, мышечные и суставные боли, кожные высыпания. Тест используется для выявления и дифференциации СКВ, склеродермии, синдрома Шегрена, Шарпа, ревматоидного артрита, воспалительных миопатий.
Результаты лабораторных тестов . Подозрение на ревматическую патологию возникает при повышении СОЭ, уровня С-реактивного белка и ЦИК. Тест назначается для подтверждения диагноза.
Диагноз ревматической болезни . Анализ производится несколько раз в год (частота определяется индивидуально) с целью контроля течения патологии, после курса применения иммуносупрессоров – для оценки эффективности терапии.

Подготовка к анализу

Биоматериал для определения антинуклеарного фактора – венозная кровь. Процедура забора осуществляется утром. Правила подготовки следующие:

Последний прием пищи должен быть совершен не позже чем за 4 часа. Пить воду разрешено в любое время.
Алкоголь, физические нагрузки, эмоциональные переживания следует исключить за день до процедуры.
Применение лекарств необходимо обсудить с врачом. Некоторые препараты провоцируют производство антител, развитие лекарственной волчанки. На фоне приема глюкокортикостероидов возможно получение ложноотрицательных данных.
Инструментальные диагностические процедуры, сеансы физиолечения должны производиться после сдачи крови.
Курение запрещено в последние 30 минут перед процедурой.

В лаборатории из крови выделяют сыворотку. Определение в ней антиядерных АТ выполняется методом РНИФ с применением клеточной культуры НЕр-2. Титр оценивается по наибольшему разведению биоматериала, при котором обнаруживается свечение ядерных структур, вид иммуноглобулинов – по характеру флуоресценции. Сроки выполнения анализа – 6-8 дней.

Нормальные значения

В норме результат исследования антинуклеарного фактора отрицательный. Титр не выше 1:160 для взрослых и детей. При интерпретации итогового значения учитываются замечания:

Низкие титры ANA уменьшают вероятность аутоиммунной патологии, но не исключают ее. При СКВ в 5% случаев результат отрицательный, производится тест на антитела к SS-антигенам.
Получение нормального результата после курса иммуносупрессивной терапии подтверждает ее успешность.
Отрицательный результат на фоне симптомов аутоиммунной патологии требует проведения дополнительных анализов (NCA, ANA методом ИФА).

Повышение показателя

Антиядерные АТ не обладают цитотоксическими свойствами, но после их связывания с антигенами образуются иммунные комплексы, запускающие процессы воспаления в сосудистых стенках. Они проявляются поражениями кожи, почечных клубочков, оболочек суставов, плевры. Развивается симптоматика, характерная для системных патологий. По типу свечения с минимальным разведением сыворотки определяются возможные заболевания:

Гомогенный . Диффузная флуоресценция указывает на наличие АТ к ds ДНК, гистонам. Определяется при СКВ и лекарственной волчанке.
Периферический . Тип свечения обусловлен расположением хроматина, выявляется при наличии Ig к компонентам ДНК, специфичным для СКВ.
Гранулярный . Антигенами являются комплексы нуклеопротеинов. Свечение неспецифично, обнаруживается при многих ревматических болезнях. Высокий титр и крупногранулярная флуоресценция наиболее характерны для синдрома Шарпа.
Нуклеарный . Отражает наличие специфических Ig к структурам ядрышка. Выявляет склеродермию и синдром Шегрена. Редко отмечается при эндокринопатиях, кожных патологиях, пересадке органов.
Центромерный. Антигенами являются центромеры хромосом. Свечение подтверждает лимитированную склеродермию.
Цитоплазматический . Провоцируется наличием антител к тРНК-синтетазе (Jo-1), рибосомам, органеллам. Позволяет определить воспалительные миопатии, аутоиммунные поражения печени.
Митохондриальный. Антигенами являются компоненты пируватдекарбоксилазного комплекса. Свечение характерно для первичного билиарного цирроза.
Точечный . Связан с циркуляцией АТ к нуклеопротеинам, ассоциируется с аутоиммунными поражениями печени.

Снижение показателя

Снижение показателя имеет прогностическую ценность при мониторинге системных заболеваний соединительной ткани. Уровень ANA коррелирует с активностью патологических процессов, поэтому уменьшение их концентрации – признак ремиссии, успешности терапии.